Лабораторная работа №18

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ влияния различных факторов

на активность ФПФазы

 

  Скорость ферментативных реакций может регулироваться различными факторами. В данной работе требуется изучить влияние различных веществ на активность ФПФазы (молибдат аммония, фторид натрия, фосфат натрия, дитиотреитол, аскорбиновая кислота, сульфат цинка).

Реактивы: 0,3 М Na-ацетатный буфер рН 5,8,3 мМ пНФФ в0,3 М Na-ацетатном буфере рН 5,8, 0,1 н NaOH, препарат фермента, молибдат аммония, фторид натрия, фосфат натрия, дитиотреитол, аскорбиновая кислота, сульфат цинка.

Оборудование: термостат, спектрофотометр, автоматические пипетки, пробирки, штатив.

Ход работы

Эффективные концентрации реагентов устанавливают опытным путем, Их растворы готовят на0,3 МNa-ацетатном буфере рН 5,8. Активность фермента определяют при различных концентрациях соединений. На основании полученных данных строят график зависимости активности ФПФазы от концентрации веществ.

Пробы готовят следующим образом:

 

Проба	пНФФ, мкл	ФПФаза, мкл	Раствор вещества, мкл	Буфер, мкл
Опыт	50	20	30	0
Контроль	50	20	0	30
Проба сравнения	50	0	30	20

 

Пробы инкубируют 15 мин, затем добавляют 3 мл 0,1 н NaOH. Далее рассчитывают активность ФПФазы, как указано в лабораторной работе №12 .