ЛАБОРАТОРНАЯ работа №5
Определение изоэлектрической точки желатины
В изоэлектрической точке растворы белков неустойчивы. Молекулы белка с одинаковым количеством положительных и отрицательных зарядов легко выпадают в осадок. Значение рН, соответствующее изоэлектрической точке, является характерным для каждого белка. Выпадение белка в осадок можно ускорить добавлением водоотнимающих веществ, например, этилового спирта.
Желатина (желатин) – полидесперсная смесь полипептидов (молекулярная масса–50–70 тыс. Д), образуемая из коллагена.
Реактивы: 0,5 %-й раствор желатины;0,1 М раствор уксусной кислоты;0,1 М раствор ацетата натрия; 96 %-й этиловый спирт.
Оборудование: пробирки; мерные пипетки.
Ход работы
- В пять пронумерованных пробирок прилейте растворы уксусной кислоты и ацетата натрия в количествах, указанных в таблице.
- После чего в каждую пробирку добавьте по 1 см3 раствора желатины и хорошо перемешайте.
- В каждую пробирку прибавьте по 4 см3 этилового спирта и снова перемешайте.
- Через 5–10 мин. просмотрите все пробирки и оцените степень мутности полученных смесей. рН наиболее мутной смеси соответствует изоэлектрической точке желатины.
Оформление результатов
Результаты опыта оформите в виде таблицы. Определите изоэлектрическую точку желатины.
|
№ про-ббирки |
Состав буферной смеси, см3 |
рН смеси |
0,5 %-й раствор желатины, см3 |
Этиловый спирт, см3 |
Степень мутнсти (по 5 балльной шкале) |
|
|
0,1 М СH3COOH |
0,1 M СH3COONa |
|||||
|
1,8 |
0,2 |
3,8 |
1 |
4 |
|
|
|
1,4 |
0,6 |
4,4 |
1 |
4 |
|
|
|
1,0 |
1,0 |
4,7 |
1 |
4 |
|
|
|
0,6 |
1,4 |
5,1 |
1 |
4 |
|
|
|
0,2 |
1,8 |
5,7 |
1 |
4 |
|
|