Лабораторная работа №37

 

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ САХАРОЗЫ И ГЛЮКОЗЫ

 

Принцип метода. Глюкоза при нагревании с о–толуидином в растворе уксусной кислоты дает зеленое окрашивание, интенсивность которого пропорциональна содержанию глюкозы. Содержание глюкозы определяют в жидкости, из которой предварительно удаляют белок.

Сахарозу в пробе определяют после его кислотного гидролиза.

Реактивы: орто–толуидиновый реактив, ТХУ 30 % –й раствор, стандартный раствор глюкозы 2 мг/мл,  2 н соляная кислота.

Оборудование: пробирки, кюветы, спектрофотометр, центрифуга.

Ход работы

 

№ пробирки	Содержимое	Действия
1	0,5 мл. опытной жидкости + 0,5 мл. ТХУ	1)10 мин Выдержать, до выпадения белого осадка 2) Отцентрифугировать 3) Отобрать 0,5 мл
2	0,5 мл стандарта (1 мг глюкозы) + 0,5 мл. ТХУ	Отобрать 0,5 мл
3	0,5 мл. NaCl + 0,5 мл. ТХУ	Отобрать 0,5 мл

Ко всем 0,5 мл  из каждой пробирки добавить по 2 мл  орто–толуидинового реактива.

Пробирку 1` прокипятить в водяной бане в течении 8 минут.

Измерить оптическую плотность содержимого пробирки 1` против контрольной 2` пробы при длине волны  640 нм.

По формуле  Cоп = (Cст*Eоп)/Eст =    мг/мл рассчитать содержание глюкозы в опытной жидкости.

Соп – концентрация глюкозы в исследуемой пробе,

Сст – концентрация глюкозы в стандартной пробе,

Еоп и Ест – оптическая плотность опытной и стандартной проб.

Для определения сахара к 1 мл исследуемой пробы добавляют 0,5 мл 2 н соляной кислоты и проводят гидролиз 20 минут при температуре 80 ºС. Полученный гидролизат охлаждают и нейтрализуют 0,5 мл 2 н раствора гидроксида натрия. Далее в гидролизате определяют содержание глюкозы С в мг/мл. Концентрацию сахарозы находят по разнице содержания глюкозы в растворе после и до кислотного гидролиза.