Лабораторная работа №56
ИЗМЕРЕНИЕ СПЕКТРА ПОГЛОЩЕНИЯ РИБОФЛАВИНА.
ПРОВЕРКА ЗАКОНА БУГЕРА – ЛАМБЕРТА – БЕРА
Рибофлавин (витамин В2) широко распространен в природе, содержится в бобовых, дрожжах, молоке, яичном желтке. Животные не способны синтезировать рибофлавин, и получают его с пищей, суточная потребность – 2 – 2,5 мг в сутки. Рибофлавин обладает характерным спектром поглощения с λ =445, 347, 268 и 223 нм с ε =12,3 ∙103, 10,8 ∙103, 31,4 ∙103 и 30,1∙ 103 М–1 ∙ см–1, соответственно (0,05 М NaOH)
Молекулярная масса рибофлавина – 376,4.
Реактивы: рибофлавин;0,05 М раствор NaOH.
Оборудование: спектрофотометр СФ–46 (ЛОМО), автоматические пипетки объемом 10 – 100 мкл и 200 – 1000 мкл, пробирки, спектрофотометрические кюветы, весы аналитические
Ход работы
1. Приготовим исходный раствор рибофлавина в 0,05 М NaOH – 4∙10–3 М.
2. Приготовим серию растворов рибофлавина различной концентрации
|
№ пробы |
Концентрация рибофлавина, моль/л |
Объем растворителя (H2О), мл |
Объем внесенного р–ра рибофлавина, мкл |
Д445 |
|
1 |
0 |
2 |
0 |
|
|
2 |
2 ∙10–5 |
2 |
10 |
|
|
3 |
4∙10–5 |
2 |
20 |
|
|
4 |
6 ∙10–5 |
2 |
30 |
|
|
5 |
8 ∙10–5 |
2 |
40 |
|
|
6 |
10–4 |
2 |
50 |
|
3. Регистрируем спектр поглощения раствора рибофлавина 10–4 М в видимом диапазоне 300 – 500 нм, определяя оптическую плотность через каждые 10 нм. Отображаем график зависимости Д (λ) – спектр поглощения.
4. Регистрируем оптическую плотность растворов рибофлавина различной концентрации в максимуме поглощения – при длине волны 445 нм. Данные вносят в таблицу.
5. Отображаем график зависимости Д = f(с) – график Бугера – Ламберта – Бера. Определяем коэффициент молярной экстинкции ε при длине волны 445 нм.