Лабораторная работа №55

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ АЦЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЫ

 

Принцип метода. Ацетилтиохолин под действием фермента распадается и образует с 5,5–дитио–бис–(2–нитробензойной) кислотой (ДТНБ) окрашенный комплекс холин–SH–ДТНБ, имеющий максимум поглощения при 412 нм.

Реактивы: 5,5–дитио–бис–(2–нитробензойная) кислота0,1 мМ,0,04 мМ ацетилтиохолина в0,1 М Na–фосфатном буфере, рН 7,6. Суспензия мембран.

Оборудование: пробирки, кюветы, спектрофотометр, гомогенизатор, центрифуга с охлаждением.

Ход работы

К 2 мл Na–фосфатного буфера, рН 7,6, содержащего 0,1 мМ ДТНБ и 0,04 мМ ацетилтиохолина, добавляют 30 мкл суспензии мембран и регистрируют рост абсорбции при 412 нм (Gorun, 1978)