Лабораторная работа №44

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ОБЩИХ

ФОСФОЛИПИДОВ В ТКАНЯХ

 

Цель работы: ознакомиться с фотометрическим методом определения содержания общих фосфолипидов в тканях.

Принцип метода. Метод основан на определении неорганического фосфора, образованного при кислотном гидролизе фосфолипидов. Содержание фосфора определяют по образованию комплекса с молибдатом аммония и его восстановлению аскорбатом до появления интенсивно синего цвета с максимумом светопоглощения 750 нм.

Реактивы: молибдат аммония 2 % раствор; аскорбиновая кислота 2 % раствор; 20 % ТХУ; 40 % КОН, приборы и реактивы.

Оборудование: пробирки, кюветы, спектрофотометр, гомогенизатор, центрифуга с охлаждением.

Ход работы

К 0,5 мл раствора липидов в хлороформе прибавить 1 мл концентрированной хлорной кислоты и сжигать при температуре около 180 °C. После охлаждения объем довести водой до 2 мл, отобрать 0,2 мл и добавить 1,8 мл воды, a затем 0,2 мл 10% аскорбата, 2 мл 1 % молибдата аммония. После 20-минутной инкубации в 45 °C, измерить оптическую плотность при 750 нм. Аналогично поступить с пробой стандартного раствора фосфата и с пробой на чистоту реактивов (Кейтс, 1975).