Работа 3. Обнаружение дегидрогеназ в растениях по восстановлению метиловой сини

 

Дегидрогеназы – ферменты, катализирующие отщепление водорода от дыхательного субстрата (AH₂) и перенос его к промежуточным или конечным акцепторам водорода. Обнаружение дегидрогеназ основано на изменении окраски метиленовой сини (M_c), которая в окисленном виде имеет синий цвет, а при восстановлении переходит в бесцветную лейкоформу. Восстановление краски происходит по следующей схеме:

 

 

Материалы и оборудование. Набухшие семена гороха, 0,005 %-й раствор метиленовой сини, дистиллированная вода, пробирки с пробками, стеклянный термостойкий стакан на 250 см³ (2 шт.), стеклянные пипетки на 5 см³, чашки Петри, стеклограф, резиновые пробки к пробиркам, штатив для пробирок, песочные часы на 3 мин, термостат, электроплитка.

Ход работы. Набухшие семена гороха очистите от семенной кожуры. Поместите по 3 очищенных от семенной кожуры семени гороха в две пробирки. В первую – семена, убитые кипячением в течение 5 мин в стакане на плитке, во вторую – живые. В обе пробирки на 3 минуты налейте 5 см³ 0,005 %-й раствор метиленовой сини. Затем краску слейте, промойте семена водопроводной водой и залейте их 5 см³ дистиллированной воды. Пробирки закройте пробками и поставьте в термостат на 30 мин при температуре 28 – 30 °С. Обратите внимание на окраску семян в обеих пробирках в начале и конце получасового периода. Затем горох из пробирок высыпьте в чашки Петри и оставьте на воздухе, пронаблюдайте за изменением окраски. Результаты опыта внесите в таблицу 20.

 

Таблица 20

 

Результаты опыта по обнаружению дегидрогеназ

 

 

В выводах укажите причины разной окраски в контроле и опыте.